Назначение набора
Набор реактивов Real-time-PCR-HER2/neu предназначен для быстрого и эффективного анализа дозы онкогена HER2/neu относительно референсгена в геномной ДНК человека с помощью ПЦР в реальном времени. Данная технология имеет хорошую корреляцию с традиционным иммуногистохимическим (ИГХ) методом диагностики HER2-статуса опухолей. Кроме того, ПЦР-РВ является прекрасной альтернативой методу флуоресцентной in situ гибридизации (FISH). Сбор данных происходит в ходе выполнения ПЦР непосредственно в закрытой пробирке, что минимизирует риск контаминации и существенно упрощает процесс анализа.
Набор оптимизирован для использования с амплификатором для ПЦР в режиме реального времени “CFX96” (Bio-Rad, США). Использование других приборов может потребовать изменения параметров ПЦР и повлиять на чувствительность метода. Набор предназначен для клинической диагностики in vitro.
Регистрационное удостоверение № ФСР 2012/13492.
Характеристика набора
Набор содержит достаточное количество реагентов для проведения 50 реакций. Рекомендуемое количество ДНК для проведения одной реакции составляет 1-400 нг.
Материал для исследования
Исходным материалом для проведения анализа должна быть геномная ДНК.
Условия хранения
Хранить в темноте при -18оС в течение 12 месяцев.
Принцип действия набора реактивов
Доза онкогена HER2/neu в геномной ДНК человека определяется относительно референс-гена. В качестве референс-гена в данном наборе использован ген UBC, доза которого остается постоянной как в нормальной, так и в опухолевой ДНК. Продукты ПЦР гена HER2/neu и референс-гена идентифицируются в 5′-экзо-нуклеазной реакции с помощью зондов меченных FAM или ROX. Набор также включает ДНК положительного стандарта с увеличенной дозой гена HER2/neu и ДНК нормировочного стандарта с нормальной дозой гена HER2/neu.
Тест на определение дозы гена HER2/neu состоит из двух этапов:
Проверка образцов ДНК в нормировочной ПЦР
Различные разведения образцов ДНК сравниваются в нормировочной ПЦР с ДНК нормировочного стандарта, входящей в набор. Для дальнейшего анализа дозы гена HER2/neu выбирают разведение образца ДНК, которое имеет наиболее близкую величину Ct относительно нормировочного ДНК стандарта.
Анализ дозы гена HER2/neu в нормированных по концентрации образцах
ДНК методом ПЦР в реальном времени
Дозу гена HER2/neu в каждом образце опухолевой ДНК определяют относительно дозы референс-гена UBC в этом же образце. Для определения дозы гена HER2/neu используется метод ΔΔCt с дальнейшим переводом полученного значения в абсолютные числа по формуле:
NHER2/neu = 1,95ΔΔCt, где NHER2/neu –относительное изменение дозы гена HER2/neu;
1,95 – эффективность ПЦР для генов HER2/neu и UBC, полученная экспериментальным путем.
- Образец считается с увеличенной дозой гена HER2/neu, если значение NHER2/neu ≥2.
- Образец считается с неувеличенной дозой гена HER2/neu, если значение NHER2/neu < 1,5.
- Результат анализа дозы гена HER2/neu следует считать сомнительным, если 1,51 < значение NHER2/neu < 1,99.
Кривые флуоресценции при анализе дозы гена HER2/neu (пунктирные линии) относительно референс-гена UBC (сплошные линии) для:
Каталог нашей продукции
