Наборы реактивов для выявления мутации G735A в гене DPYD методом ПЦР в режиме реального времени

таблица 9

иконка 16Назначение набора

Набор реактивов Real-time-PCR-DPYD-G735A предназначен для выявления точечной мутации GGT→GCT в 735 кодоне гена DPYD, коррелирующей с токсич-ностью для организма 5-фторурацила.
Набор оптимизирован для использования с амплификатором для ПЦР в режиме реального времени “CFX96” (Bio-Rad, США). Использование других приборов может потребовать изменения параметров ПЦР и повлиять на чувствительность метода. Набор предназначен только для исследовательского применения.

Иконка 12Характеристики набора

 Набор содержит достаточное количество реагентов для проведения 50 реакций. Исходным материалом для проведения анализа должна быть геномная ДНК. Рекомендуемое количество ДНК для проведения одной реакции составляет 10-100 нг. Минимальное количество ДНК, необходимое для анализа, – 2 нг. Максимальное количество ДНК, которое может быть использовано для 1 анализа, – 1000 нг.

иконки 13Материал для исследования

В качестве материала для анализа используется геномная ДНК

иконки 15Условия хранения

Хранить в темноте при -18оС в течение 12 месяцев.

таблица 10

иконка 16Принцип действия наборов реактивов

Анализ проводится методом аллель-специфичной ПЦР в реальном времени. Для выполнения анализа необходимо провести две реакции с исследуемым образцом ДНК:

  • с использованием смеси праймеров «735-W» (для детекции ДНК гена DPYD дикого типа);
  • с использованием смеси праймеров «735-M» (для детекции ДНК гена DPYD с мутацией G735A).

В каждый эксперимент рекомендуется включать ПЦР с положительным и отрицательным стандартами и контролем без матрицы. Сбор данных происходит в ходе выполнения ПЦР непосредственно в закрытой пробирке, что минимизирует риск контаминации и существенно упрощает процесс анализа.

график 4Образец является отрицательным (без мутации), если при использовании смеси праймеров «735-W» появляется кривая амплификации, которая пересекает порог флуоресценции не позднее 35 цикла и отсутствует кривая амплификации при использовании смеси праймеров «735-M» или пересекает порог флуоресценции не ранее чем через 8 циклов после кривой W.

 

график 5Образец является положительным (содержащим мутацию), если при использовании смесей праймеров «735- М» и «735- W» появляются кривые амплификации, пересекающие порог флуоресценции с разницей не более чем в 1 цикл (в идеальном случае одна кривая должна накладываться на другую).

 

 

 

*ДНК «дикого типа» (W-синие линии) и ДНК с мутацией (М-зелёные линии)

Скачать каталог нашей продукцииPDF-Icon 

Связаться с нами с помощью контактной формы:

Ваше имя (обязательно)

Ваш e-mail (обязательно)

Тема

Сообщение

Комментарии запрещены.