Назначение набора
Набор реактивов Real-time-PCR-DPYD-G735A предназначен для выявления точечной мутации GGT→GCT в 735 кодоне гена DPYD, коррелирующей с токсич-ностью для организма 5-фторурацила.
Набор оптимизирован для использования с амплификатором для ПЦР в режиме реального времени “CFX96” (Bio-Rad, США). Использование других приборов может потребовать изменения параметров ПЦР и повлиять на чувствительность метода. Набор предназначен только для исследовательского применения.
Характеристики набора
Набор содержит достаточное количество реагентов для проведения 50 реакций. Исходным материалом для проведения анализа должна быть геномная ДНК. Рекомендуемое количество ДНК для проведения одной реакции составляет 10-100 нг. Минимальное количество ДНК, необходимое для анализа, – 2 нг. Максимальное количество ДНК, которое может быть использовано для 1 анализа, – 1000 нг.
Материал для исследования
В качестве материала для анализа используется геномная ДНК
Условия хранения
Хранить в темноте при -18оС в течение 12 месяцев.
Принцип действия наборов реактивов
Анализ проводится методом аллель-специфичной ПЦР в реальном времени. Для выполнения анализа необходимо провести две реакции с исследуемым образцом ДНК:
- с использованием смеси праймеров «735-W» (для детекции ДНК гена DPYD дикого типа);
- с использованием смеси праймеров «735-M» (для детекции ДНК гена DPYD с мутацией G735A).
В каждый эксперимент рекомендуется включать ПЦР с положительным и отрицательным стандартами и контролем без матрицы. Сбор данных происходит в ходе выполнения ПЦР непосредственно в закрытой пробирке, что минимизирует риск контаминации и существенно упрощает процесс анализа.
Образец является отрицательным (без мутации), если при использовании смеси праймеров «735-W» появляется кривая амплификации, которая пересекает порог флуоресценции не позднее 35 цикла и отсутствует кривая амплификации при использовании смеси праймеров «735-M» или пересекает порог флуоресценции не ранее чем через 8 циклов после кривой W.
Образец является положительным (содержащим мутацию), если при использовании смесей праймеров «735- М» и «735- W» появляются кривые амплификации, пересекающие порог флуоресценции с разницей не более чем в 1 цикл (в идеальном случае одна кривая должна накладываться на другую).
*ДНК «дикого типа» (W-синие линии) и ДНК с мутацией (М-зелёные линии)
Каталог нашей продукции
