Hot Start Taq ДНК-полимераза с антителами
Hot Start Taq ДНК-полимераза c антителами представляет собой смесь термостабильной Taq ДНК-полимеразы и специальных блокирующих моноклональных антител. Антитела блокируют полимеразную активность при температурах до 50°С, что позволяет избежать неспецифической ампилификации на стадиях подготовки реакции. Во время начальной стадии ПЦР (денатурации) происходит диссоциация комплекса и моноклональные антитела необратимо денатурируют, а Taq ДНК-полимераза становится функционально активной. Фермент катализирует матричный синтез ДНК путем переноса нуклеотида от дНТФ на 3’-конец ДНК. Использование Hot Start Taq ДНК-полимеразы значительно повышает специфичность и чувствительность ПЦР. В настоящее время использование Hot Start вариантов полимеразы стало де-факто стандартом для количественной ПЦР и большинства диагностических приложений. Максимальная длина амплифицированного фрагмента может достигать 5000 п.н.
Фермент выделен из штамма E.coli, несущего рекомбинантную плазмиду, содержащую рекомбинантный ген ДНК-полимеразы из Thermus aquaticus. Подходит для чувствительных приложений, таких как ПЦР из единичных клеток, создание смесей для одноступенчатой ОТ-ПЦР в реальном времени (при использовании с подходящей ревертазой).
Контроль качества: ПЦР (активность), SDS-PAGE (качество очистки фермента), тест на нуклеазную активность, тест хранения при 25°С, тест на контаминацию геномной ДНК E.сoli.
Фермент Taq ДНК-полимеразу рекомендуется хранить при -20°C. Срок годности 1 год с даты проверки.
Рекомендуемые условия реакции:
- • Используйте 1-5 е.а. фермента на 100 мкл реакционной смеси.
- • Конечная концентрация трифосфатов в реакционной смеси – 0.1-0.2 mM.
- • Стадию элонгации проводить при 72°С, скорость амплификации составляет 1000-2000 п.о./мин.
| Кат № | Наименование | Концентрация, ед./мкл | Количество, ед. |
|---|---|---|---|
| HST-01 | Hot Start Taq ДНК-полимераза с антителами | 5 | 5000 |
| HST-02 | Hot Start Taq ДНК-полимераза с антителами | 5 | 1000 |
| HST-03 | Hot Start Taq ДНК-полимераза с антителами | 1 | 1000 |
Taq ДНК-полимераза
Фермент Taq ДНК-полимераза может применяться для различных вариантов ПЦР, включая ПЦР в реальном времени (Real-Time PCR) с использованием TaqMan и SYBR Green. Максимальная длина амплифицированного фрагмента может достигать 5000 п.н. Фермент катализирует матричный синтез ДНК путем переноса нуклеотида от дНТФ на 3’-конец ДНК. Фермент прекрасно походит для большого круга задач, где не требуется высокая точность и достаточно молекул матрицы.
Фермент выделен из штамма E.coli, несущего рекомбинантную плазмиду, содержащую рекомбинантный ген ДНК-полимеразы из Thermus aquaticus.
Реакционный буфер: 10x AS буфер (ASB-01) входит в состав набора или приобретается отдельно.
Контроль качества: ПЦР (активность), SDS-PAGE (качество очистки фермента), тест на нуклеазную активность, тест хранения при 25°С, тест на контаминацию геномной ДНК E.сoli.
За единицу активности рекомбинантной Taq ДНК-полимеразы принимают количество фермента, необходимое для включения 10 нмоль дНТФ в кислотонерастворимую фракцию за 30 мин при 72 °C.
Рекомендуемые условия реакции:
- • Используйте 1-5 е.а. фермента на 100 мкл реакционной смеси.
- • Конечная концентрация трифосфатов в реакционной смеси – 0.1-0.2 mM.
- • Стадию элонгации проводить при 72°С, скорость амплификации составляет 1000-2000 п.о./мин.
| Кат № | Наименование | Концентрация, ед./мкл | Количество, ед. |
|---|---|---|---|
| TAQ-01 | Taq ДНК-полимераза | 1 | 1000 |
| TAQ-02 | Taq ДНК-полимераза | 1 | 1000, 10х буфер (2 мл) |
| TAQ-03 | Taq ДНК-полимераза | 5 | 1000, 10х буфер (2 мл) |
| TAQ-04 | Taq ДНК-полимераза | 5 | 1000 |
| TAQ-05 | Taq ДНК-полимераза | 5 | 5000, 10х буфер (10 мл) |
Uracil-DNA Glycosylase
Урацил-ДНК-гликозилаза (UDG) катализирует высвобождение свободного урацила из урацилсодержащей ДНК. UDG эффективно гидролизует урацил из одноцепочечной или двухцепочечной ДНК. Фермент выделен из Е. coli и не содержит эндо и экзонуклеаз. Частично инактивируется нагреванием до 95 °C.
Концентрация 10 ед/мкл.
Одна единица активности – количество фермента, необходимое для высвобождения 60 пмоль урацила в минуту из двухцепочечной урацилсодержащей ДНК.
Области применения:
- • Контроль кросс-контаминации смесей для ПЦР продуктами предыдущей амплификации
| Кат № | Наименование | Концентрация, ед./мкл | Количество, ед. |
|---|---|---|---|
|
50301 |
Урацил-ДНК-гликозилаза | 10 | 200 |
| 50302 | Урацил-ДНК-гликозилаза | 10 | 1000 |
ДНК-лигаза фага T4
Фермент ДНК-лигаза фага T4 предназначен для быстрого лигирования липких и тупых концов фрагментов ДНК. Фермент катализирует образование фосфодиэфирной связи между 5'-фосфатными и 3'-гидроксильными концевыми группами ДНК.
Фермент успешно применяется при клонировании ДНК, создании библиотек, лигировании линкеров, пробоподготовке для NGS (в том числе 3C, Hi-C). Фермент обладает высокой удельной активностью, может применяться для «экспресс клонирования». Пригоден для электротрансформации бактерий без очистки лигазной смеси. Фермент выделен из штамма E.coli, несущего рекомбинантную плазмиду, кодирующую ДНК-лигазу фага T4.
| Кат № | Наименование | Количество, ед. |
Объем, мкл |
|---|---|---|---|
|
LIG-01 |
ДНК-лигаза фага Т4 | 400 000 | 200 |
Pfu ДНК-полимераза
Термостабильная Pfu ДНК-полимераза выделена из E.сoli-продуцента, несущего рекомбинантный ген полимеразы Pyrococcus furiosus. Обладает 3'-5' экзонуклеазной активностью, что значительно повышает точность синтеза ДНК по сравнению с Taq ДНК-полимеразой (более чем в 20 раз). Фермент широко применяется в различных приложениях, где требуется высокая точность синтеза ДНК. Рекомендуется для клонирования ДНК, методик с использованием мегапраймеров, амплификации фрагментов ДНК с целью последующего секвенирования. Не добавляет на 3' конец ампликона остаток аденозина, что позволяет использовать Pfu ДНК-полимеразу для достройки «липких» концов ДНК. Pfu полимераза не включает в ампликон урацил. Из-за отсутствия 5`-3`- нуклеазной активности не пригодня для количественной ПЦР с пробами типа TaqMan. Максимальная длина амплифицированного фрагмента может достигать 35000 п.н.
Контроль качества: ПЦР (активность), SDS-PAGE (качество очистки фермента), тест на нуклеазную активность, тест хранения при 25°С, тест на контаминацию геномной ДНК E.сoli.
Буфер хранения: 50 mM Трис-HCl (pH 8.2), 0.1 mM ЭДТА, 1 mM ДТТ, 100 mM KCl, 0.1% Nonidet P40, 0.1% Tween 20, 50% глицерол
Реакционный буфер: LSB буфер для фрагментов 1-5 кб, буфер для фрагментов HSB 5-35 кб
Применение:
- • Высокоточная ПЦР
- • Получение длинных ПЦР-фрагментов
- • Достройка «липких» концов ДНК
- • Получение зондов и модифицированных ДНК-конструкций
Рекомендуемые условия реакции:
- • Используйте 1-4 ед фермента на 100 мкл реакционной смеси
- • Конечная концентрация трифосфатов в реакционной смеси – 0.1-0.2 mM
- • Стадию элонгации проводить при 72°С, скорость амплификации составляет ~1000 п.о./мин.
| Кат № | Наименование | Концентрация, ед./мкл | Количество, ед. |
|---|---|---|---|
| PFU-01 | Pfu ДНК-полимераза | 5 | 1000 |
| PFU-02 | Pfu ДНК-полимераза | 5 | 5000 |
| PFU-03 | Pfu ДНК-полимераза | 5 | 1000, 10х буфер (2 мл) |
| PFU-04 | Pfu ДНК-полимераза | 1 | 1000, 10х буфер (2 мл) |
SM-нуклеаза Serratia marcescens
Термостабильная Pfu ДНК-полимераза выделена из E.сoli-продуцента, несущего рекомбинантный ген полимеразы Pyrococcus furiosus. Обладает 3'-5' экзонуклеазной активностью, что значительно повышает точность синтеза ДНК по сравнению с Taq ДНК-полимеразой (более чем в 20 раз). Фермент широко применяется в различных приложениях, где требуется высокая точность синтеза ДНК. Рекомендуется для клонирования ДНК, методик с использованием мегапраймеров, амплификации фрагментов ДНК с целью последующего секвенирования. Не добавляет на 3' конец ампликона остаток аденозина, что позволяет использовать Pfu ДНК-полимеразу для достройки «липких» концов ДНК. Pfu полимераза не включает в ампликон урацил. Из-за отсутствия 5`-3`- нуклеазной активности не пригодня для количественной ПЦР с пробами типа TaqMan. Максимальная длина амплифицированного фрагмента может достигать 35000 п.н.
Контроль качества: ПЦР (активность), SDS-PAGE (качество очистки фермента), тест на нуклеазную активность, тест хранения при 25°С, тест на контаминацию геномной ДНК E.сoli.
Буфер хранения: 50 mM Трис-HCl (pH 8.2), 0.1 mM ЭДТА, 1 mM ДТТ, 100 mM KCl, 0.1% Nonidet P40, 0.1% Tween 20, 50% глицерол
Реакционный буфер: LSB буфер для фрагментов 1-5 кб, буфер для фрагментов HSB 5-35 кб
Применение:
- • Высокоточная ПЦР
- • Получение длинных ПЦР-фрагментов
- • Достройка «липких» концов ДНК
- • Получение зондов и модифицированных ДНК-конструкций
Рекомендуемые условия реакции:
- • Используйте 1-4 ед фермента на 100 мкл реакционной смеси
- • Конечная концентрация трифосфатов в реакционной смеси – 0.1-0.2 mM
- • Стадию элонгации проводить при 72°С, скорость амплификации составляет ~1000 п.о./мин.
| Кат № | Наименование | Концентрация, ед./мкл | Количество, ед. |
|---|---|---|---|
| BNZ-01 | SM-нуклеаза | 250 | 5 000, ≥90% (SDS-PAGE) |
| BNZ-02 | SM-нуклеаза | 250 | 25 000, ≥90% (SDS-PAGE) |
| BNZ-03 | SM-нуклеаза | 250 | 250 000, ≥90% (SDS-PAGE) |
| BNZ-04 | SM-нуклеаза | 250 | 100 000, ≥99%, Low Endotoxin |
| BNZ-05 | SM-нуклеаза | 250 | 500 000, ≥99%, Low Endotoxin |
| BNZ-06 | SM-нуклеаза | 250 | 5 000 000, ≥99%, Low Endotoxin |