Трансфекция нуклеиновых кислот в эукариотические клетки при помощи PEI
PEI – это полиэтиленимин, один из наиболее универсальных и оптимальных катионных трансфицирующих агентов. PEI пригоден для доставки плазмидной ДНК, РНК, а также олигонуклеотидов в разнообразные клеточные линии, в том числе прикрепленные и суспензионные.
Принцип трансфекции с PEI основан на том, что нуклеиновая кислота образует комплекс с катионным полимером PEI. Полученный комплекс из нуклеиновой кислоты и PEI абсорбируются на поверхности липидной мембраны и далее интернализуется внутрь клетки. В состав набора входит стабилизированный вариант PEI и специальный буфер для повышения эффективности.
Применение:
- • Трансфекция клеток в малых объемах (планшеты, небольшие чашки и флаконы);
- • Трансфекция клеток, для которых кальций-фосфатная трансфекция проходит с низкой эффективностью (CHO, HeLa и т.д.);
- • Для повышения воспроизводимости трансфекций;Для использования в биореакторах и колбах;
- • Для доставки различных нуклеиновых кислот (например, РНК, олигонуклеотиды и оцДНК) в клетки.
Функциональность данного набора PEI проверена на следующих клеточных линиях: HEK 293T (адгезионные, суспензионные), CHO (адгезионные, суспензионные), HepG2, HeLa, Sf9 и других.
Рекомендуется смена питательной среды через 4-6 часов после постановки трансфекции.
| Кат № | Наименование набора реагентов | Количество трансфекций |
|---|---|---|
| PEI-01 | Трансфекция нуклеиновых кислот в эук. клетки при помощи PEI | 65 |
| PEI-02 | Трансфекция нуклеиновых кислот в эук. клетки при помощи PEI | 325 |
Набор для трансфекции ДНК в адгезионные эукариотические клетки при помощи кальций-фосфатного метода
Кальций-фосфатная трансфекция клеток млекопитающих была предложена сравнительно давно, однако остается одним из наиболее популярных методов для доставки больших доз ДНК в прикрепленные клетки. Этот метод позволяет добиться высоких уровней трансфекции (рутинно до 100%), обеспечивает отличный выход рекомбинантных белков и высокие титры лентивирусных частиц. Успешно применяется для трансфекции средних и больших объёмов прикреплённых клеток.
В силу особенностей протокола этот метод не рекомендуется к использованию для постановки скрининговых трансфекций (в 48-, 96- и 384-луночных планшетах), однако он дешевле и эффективнее других способов трансфекции для больших форматов, начиная с T25 плашек и заканчивая многослойными фабриками.
Кальций-фосфатным методом трансфицируют прикреплённые (адгезионные) клетки, например, HEK293T, CHO и HeLa. Предпочтительные линии для данного набора: HEK293T, HEK293FT, HEK293.
Для суспензионных клеток и доставки РНК этот метод не подходит, в этих случаях оптимальна трансфекция с помощью PEI.
Преимущества кальций-фосфатного метода:
- • Высокий уровень наработки белков и вирусных частиц при низкой стоимости.
- • Очень низкая токсичность для клеток.
- • Не требуется коинкубация компонентов, сразу после образования смеси её вносят к клеткам.
- • Проведение нескольких трансфекций за один раз.
- • Трансфицирование больших объемов клеток с минимальными трудозатратами.
Плазмиды размером 3-6 т.п.н. рутинно трансфицируют 100% клеток HEK 293T.
С плазмидами размером 6-10 т.п.н. эффективность достигает ~ 90% на клетках HEK293T.
| Кат № | Наименование набора реагентов | Состав набора |
|---|---|---|
| CPT-01 | Кальций-фосфатная трансфекция | 70 трансфекций на 100 мм чашках Петри |
| CPT-02 | Кальций-фосфатная трансфекция | 140 трансфекций на 100 мм чашках Петри |